详细介绍
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
奥利华斯病毒PCR检测试剂盒说明书 | Oliveros virus(OLVV)RTPCR | BK-P9500 |
原理是由一对引物介导,能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增,经过n个热循环扩增,扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0<E<1,扩增效率=倍,使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
人β甘露糖苷酶(β Manase)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒
人β干扰素(IFN-β/IFNB)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒
人β防御素1(HβD-1)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒
人β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒
人β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒
人β-促脂素(β-LPH)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒
人β半乳糖苷酶(βGAL)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒
人β氨基己糖苷酶A(β-hexosaminidase A)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒
人β2整合素(integrin β2/CD11+CD18)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒
人β2微球蛋白(BMG/β2-MG)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒
人β2糖蛋白1抗体IgM(β2-GP1 Ab IgM)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒
人β2糖蛋白1抗体IgG(β2-GP1 Ab IgG)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒
人β2糖蛋白1抗体IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒
人β2糖蛋白1抗体IgA(β2-GP1 Ab IgA)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒
奥利华斯病毒PCR检测试剂盒说明书烯酰辅酶A水合酶含结构域蛋白2抗体 规格: 0.2ml 英文名称:ECHDC2
跨膜通道蛋白8抗体 规格: 0.2ml 英文名称:EVER2
内皮粘蛋白EMCN抗体 规格: 0.2ml 英文名称:Endomucin
FAM61B蛋白抗体 规格: 0.2ml 英文名称:FAM61B
F-box蛋白2抗体 规格: 0.2ml 英文名称:FBXO2
舌癌化疗耐药相关蛋白1 规格: 0.1ml 英文名称:TCRP1
Ⅲ型纤维连接蛋白域蛋白4抗体 规格: 0.2ml 英文名称:FNDC4
FBXL12蛋白抗体 规格: 0.2ml 英文名称:FbxL12
叉头蛋白O4抗体 规格: 0.2ml 英文名称:FOXO4
磷酸化细丝蛋白A抗体 规格: 0.1ml 英文名称:phospho-FLNA (Tyr1046)
G蛋白偶联受体C5L2蛋白抗体 规格: 0.2ml 英文名称:GPCR C5L2
鸟苷酸激酶GMK抗体 规格: 0.2ml 英文名称:GUK1
甘氨酸受体alpha 1/2/3型抗体 规格: 0.1ml 英文名称:GlyR alpha 1 + 2 + 3
磷酸化GATA结合蛋白3抗体 规格: 0.1ml 英文名称:phospho-GATA3 (Ser115)
磷酸化γ1氨基丁酸受体GABAA Rβ1抗体 规格: 0.1ml 英文名称:phospho-GARB1 (Ser434)
技术原理:
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
在聚合酶链式反应实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。( DNA高温变性低温复性)
发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。
产品咨询
联系我们
上海帛科生物技术有限公司 公司地址:上海嘉定区嘉罗公路1661 号24栋 技术支持:环保在线扫一扫 更多精彩
微信二维码
网站二维码