详细介绍
技术原理:
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
在聚合酶链式反应实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。( DNA高温变性低温复性)
发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
鹦鹉喙羽病病毒PCR检测试剂盒价格 | Beak and Feather Disease Virus PCR | BK-P8870 |
原理是由一对引物介导,能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增,经过n个热循环扩增,扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0<E<1,扩增效率=倍,使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
弧菌显色培养基/Vibrio Chromogenic Medium用于弧菌的显色培养,副溶血性弧菌显蓝色,其他弧菌显无色1升国产/进口
薛瓦酵母 Saccharomyces chevalieri香菇 Lentinula edodes
大丽轮枝菌 Verticillium dahliea Kleb人成纤维肉瘤细胞
C127(小鼠腺细胞)5×106cells/瓶×2
LM/TK(小鼠胸腺激酶缺陷细胞)5×106cells/瓶×2
结肠转移关联基因1(MACC1)重组蛋白英文名称:Recombinant Metastasis Associated In Colon Cancer 1 (MACC1)
酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiaemCF, 小鼠心脏成纤维细胞
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载脂蛋白H(APOH)重组蛋白英文名称:Recombinant Apolipoprotein H (APOH)
大鼠脑动脉血管内细胞*培养基100mL
鹦鹉喙羽病病毒PCR检测试剂盒价格乙二茂铁 212.07 Ethylene based two*:1271-51-8分子量: C12H12Fe
酸钾 214 Potassium iodate*:2139718分子量: KIO3
2-氯-3-硝甲 171.58 2- -3- nitro toluene*:3970-40-9分子量: C7H6ClNO2
1-(4-溴)-4-氯-1H-吡唑[3,4-D]嘧 1- (4-) -4- -1H- [3,4-D]*:832715-52-3分子量:
双(六氟乙丙酮)合铜(II)水合物 477.65 双(六氟乙丙酮)合铜(II)水合物*:14781-45-4分子量: C10H2CuF12O4·xH2O
异辛酸铁 485.4555 Different acid iron*:7321-53-1分子量: C24H45FeO6
1,3-双(4-甲氧氧) 322.36 1,3- bis (4-) benzene*:13118-91-7分子量: C20H18O4
3,4-二氟溴铝 3,4- two fluorine phenyl bromide 217.29分子量: C6H3BrF2Mg*:90897-92-0
金胺O Gold amine O 321.84分子量: C17H22ClN3*:2465-27-2
聚乙 Polystyrene 分子量: (C8H8)n*:9003-53-6
雌二 Estradiol 272.38分子量: C18H24O2*:50-28-2
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