禽痘病毒PCR检测试剂盒说明书

技术原理：
 DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
       在聚合酶链式反应实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。（ DNA高温变性低温复性）
       发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

原理是由一对引物介导，能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增，经过n个热循环扩增，扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0＜E＜1,扩增效率＝倍，使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为：
①引物与模板DNA特异正确的结合；
②碱基配对原则；
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；
​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

燕麦镰刀菌 Gibberella avenacea球型芽孢杆菌 Bacillus sphaerious

链轮枝菌 Streptoverticillium sp.粟酒裂殖酵母 Schizosaccharomyces pombe

沙门氏菌显色培养基 规格： 1000ml 用途： 用于沙门氏菌的快速分离和鉴定。（GB4789.40-2010）

葡萄球菌属 Staphylococcus sp.小肠结肠炎耶尔森氏菌 Yersinia enterocolitica

亮绿琼脂培养基/Brilliant Green Agar沙门氏菌分离培养250克国产/进口

亚酸胱氨酸增菌(SC) 规格： 100g 用途： 用于沙门氏菌选择性增菌培养。(GB18466-2005)

植物杆菌 Lactobacillus plantarum大豆慢生瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

赖氨酸脱羧酶培养基/Lysine Decarboxylase Medium用于细菌赖氨酸脱羧酶试验5克国产/进口

WI-38(人胚肺细胞)5×106cells/瓶×2

酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae植物杆菌 Lactobacillus plantarum

人肤肥大细胞*培养基100mL

禽痘病毒PCR检测试剂盒说明书溴百里香酚兰  Bromothymol blue  624.38分子量： C27H28Br2O5S*：76-59-5

2--4--6-甲嘧  139.16  2- amino -4- -6-*：28840-64-4分子量： C5H9N5

异补骨脂查尔酮  ISO bavachalcone  分子量：*：

萘酚AS-BI硫钾  Naphthol AS-BI potassium sulfate  分子量：*：78689

固绿FCF  Solid green FCF  808.91分子量：*：2353-45-9

无水二氢钾  94.97  Anhydrous potassium dihydrogen phosphate*：14265-44-2分子量： O4P-3

2,7-二溴-9-(9-十七烷)咔唑  563.46  2,7- -9- (9- dibromo seventeen alkyl carbazole)*：955964-73-5分子量： C29H41Br2N

5-溴-2-硝吡  202.99  5- -2- nitro pyridine*：39856-50-3分子量： C5H3BrN2O2

活性橙16  Reactive Orange 16  分子量： C20H17N3Na2O11S3*：12225-88-6

树脂天青  Resazurin  251.17分子量： C12H6NNaO4*：62758-13-8

7--1-甲-1,2,3,4-四氢喹啉  162.23  7- amino -1- methyl -1,2,3,4- four*：304690-94-6分子量： C10H14N2